一、克隆的早期研究
克隆一詞是英文單詞clone的音譯，作為名詞，c1one通常被意譯為無(wú)性繁殖系。同一克隆內(nèi)所有成員的遺傳構(gòu)成是完全相同的，例外僅見(jiàn)于有突變發(fā)生時(shí)。自然界早已存在天然植物、動(dòng)物和微生物的克隆，例如：同卵雙胞胎實(shí)際上就是一種克隆。然而，天然的哺乳動(dòng)物克隆的發(fā)生率極低，成員數(shù)目太少（一般為兩個(gè)），且缺乏目的性，所以很少能夠被用來(lái)為人類(lèi)造福，因此，人們開(kāi)始探索用人工的方法來(lái)生產(chǎn)高等動(dòng)物克隆。這樣，克隆一詞就開(kāi)始被用作動(dòng)詞，指人工培育克隆動(dòng)物這一動(dòng)作。
目前，生產(chǎn)哺乳動(dòng)物克隆的方法主要有胚胎分割和細(xì)胞核移植兩種?？寺⊙颉岸嗬颉保约捌浜蟾鲊?guó)科學(xué)家培育的各種克隆動(dòng)物，采用的都是細(xì)胞核移植技術(shù)。所謂細(xì)胞核移植，是指將不同發(fā)育時(shí)期的胚胎或成體動(dòng)物的細(xì)胞核，經(jīng)顯微手術(shù)和細(xì)胞融合方法移植到去核卵母細(xì)胞中，重新組成胚胎并使之發(fā)育成熟的過(guò)程。與胚胎分割技術(shù)不同，細(xì)胞核移植技術(shù)，特別是細(xì)胞核連續(xù)移植技術(shù)可以產(chǎn)生無(wú)限個(gè)遺傳相同的個(gè)體。由于細(xì)胞核移植是產(chǎn)生克隆動(dòng)物的有效方法，故人們往往把它稱(chēng)為動(dòng)物克隆技術(shù)。
采用細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的設(shè)想，初由漢斯·施佩曼在1938年提出，他稱(chēng)之為“奇異的實(shí)驗(yàn)”，即從發(fā)育到后期的胚胎（成熟或未成熟的胚胎均可）中取出細(xì)胞核，將其移植到一個(gè)卵子中。這一設(shè)想是現(xiàn)在克隆動(dòng)物的基本途徑。
從1952年起，科學(xué)家們首先采用青蛙開(kāi)展細(xì)胞核移植克隆實(shí)驗(yàn)，先后獲得了蝌蚪和成體蛙。1963年，我國(guó)童第周教授領(lǐng)導(dǎo)的科研組，首先以金魚(yú)等為材料，研究了魚(yú)類(lèi)胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)，獲得成功。
哺乳動(dòng)物胚胎細(xì)胞核移植研究的初成果在1981年取得——卡爾·伊爾門(mén)澤和彼得·霍佩用鼠胚胎細(xì)胞培育出發(fā)育正常的小鼠。1984年，施特恩·維拉德森用取自羊的未成熟胚胎細(xì)胞克隆出一只活產(chǎn)羊，其他人后來(lái)利用牛、豬、山羊、兔和獼猴等各種動(dòng)物對(duì)他采用的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行了重復(fù)實(shí)驗(yàn)。1989年，維拉德森獲得連續(xù)移核二代的克隆牛。1994年，尼爾·菲爾斯特用發(fā)育到至少有120個(gè)細(xì)胞的晚期胚胎克隆牛。到1995年，在主要的哺乳動(dòng)物中，胚胎細(xì)胞核移植都獲得成功，包括冷凍和體外生產(chǎn)的胚胎；對(duì)胚胎干細(xì)胞或成體干細(xì)胞的核移植實(shí)驗(yàn)，也都做了嘗試。但到1995年為止，成體動(dòng)物已分化細(xì)胞核移植一直未能取得成功。

二、克隆羊“多莉”的意義和引起的反響
以上事實(shí)說(shuō)明，在1997年2月英國(guó)羅斯林研究所維爾穆特博士科研組公布體細(xì)胞克隆羊“多莉”培育成功之前，胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)已經(jīng)有了很大的發(fā)展。實(shí)際上，“多莉”的克隆在核移植技術(shù)上沿襲了胚胎細(xì)胞核移植的全部過(guò)程，但這并不能減低“多莉”的重大意義，因?yàn)樗鞘澜缟侠?jīng)體細(xì)胞核移植出生的動(dòng)物，是克隆技術(shù)領(lǐng)域研究的巨大突破。這一巨大進(jìn)展意味著：在理論上證明了，同植物細(xì)胞一樣，分化了的動(dòng)物細(xì)胞核也具有全能性，在分化過(guò)程中細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)沒(méi)有不可逆變化；在實(shí)踐上證明了，利用體細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物克隆的技術(shù)是可行的，將有無(wú)數(shù)相同的細(xì)胞可用來(lái)作為供體進(jìn)行核移植，并且在與卵細(xì)胞相融合前可對(duì)這些供體細(xì)胞進(jìn)行一系列復(fù)雜的遺傳操作，從而為大規(guī)模復(fù)制動(dòng)物品種和生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物了有效方法。
在理論上，利用同樣方法，人可以復(fù)制“克隆人”，這意味著以往科幻小說(shuō)中的獨(dú)裁狂人克隆自己的想法是完全可以實(shí)現(xiàn)的。因此，“多莉”的誕生在世界各國(guó)科學(xué)界、政界乃至宗教界都引起了強(qiáng)烈反響，并引發(fā)了一場(chǎng)由克隆人所衍生的道德問(wèn)題的討論。各國(guó)政府有關(guān)人士、民間紛紛作出反應(yīng)：克隆人類(lèi)有悖于倫理道德。盡管如此，克隆技術(shù)的巨大理論意義和實(shí)用價(jià)值促使科學(xué)家們加快了研究的步伐，從而使動(dòng)物克隆技術(shù)的研究與開(kāi)發(fā)進(jìn)入一個(gè)高潮。

三、近3年來(lái)克隆研究的重要成果
克隆羊“多莉”的誕生在全世界掀起了克隆研究熱潮，隨后，有關(guān)克隆動(dòng)物的報(bào)道接連不斷。1997年3月，即“多莉”誕生后1個(gè)月，美國(guó)、中國(guó)臺(tái)灣和澳大利亞科學(xué)家分別發(fā)表了他們成功克隆猴子、豬和牛的消息。不過(guò)，他們都是采用胚胎細(xì)胞進(jìn)行克隆，其意義不能與“多莉”相比。同年7月，羅斯林研究所和PPL公司宣布用基因改造過(guò)的胎兒成纖維細(xì)胞克隆出世界上頭帶有人類(lèi)基因的轉(zhuǎn)基因綿羊“波莉”（Polly）。這一成果顯示了克隆技術(shù)在培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物方面的巨大應(yīng)用價(jià)值。
1998年7月，美國(guó)夏威夷大學(xué)Wakayama等報(bào)道，由小鼠卵丘細(xì)胞克隆了27只成活小鼠，其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代，這是繼“多莉”以后的**批哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植后代。此外，Wakayama等人采用了與“多莉”不同的、新的、相對(duì)簡(jiǎn)單的且成功率較高的克隆技術(shù)，這一技術(shù)以該大學(xué)所在地而命名為“檀香山技術(shù)”。
此后，美國(guó)、法國(guó)、荷蘭和韓國(guó)等國(guó)科學(xué)家也相繼報(bào)道了體細(xì)胞克隆牛成功的消息；日本科學(xué)家的研究熱情尤為驚人，1998年7月至1999年4月，東京農(nóng)業(yè)大學(xué)、近畿大學(xué)、家畜改良事業(yè)團(tuán)、地方（石川縣、大分縣和鹿兒島縣等）家畜試驗(yàn)場(chǎng)以及民間企業(yè)（如日本大的奶商品公司雪印乳業(yè)等）紛紛報(bào)道了，他們采用牛耳部、臀部肌肉、卵丘細(xì)胞以及初乳中提取的乳腺細(xì)胞克隆牛的成果。至1999年底，全世界已有6種類(lèi)型細(xì)胞——胎兒成纖維細(xì)胞、乳腺細(xì)胞、卵丘細(xì)胞、輸卵管／**上皮細(xì)胞、肌肉細(xì)胞和耳部皮膚細(xì)胞的體細(xì)胞克隆后代成功誕生。
2000年6月，中國(guó)西北農(nóng)林科技大學(xué)利用成年山羊體細(xì)胞克隆出兩只“克隆羊”，但其中一只因呼吸系統(tǒng)發(fā)育而早夭。據(jù)介紹，所采用的克隆技術(shù)為該研究組自己研究所得，與克隆“多莉”的技術(shù)完全不同，這表明我國(guó)科學(xué)家也掌握了體細(xì)胞克隆的**技術(shù)。
在不同種間進(jìn)行細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)也取得了一些可喜成果，1998年1月，美國(guó)威斯康星一麥迪遜大學(xué)的科學(xué)家們以牛的卵子為受體，成功克隆出豬、牛、羊、鼠和獼猴五種哺乳動(dòng)物的胚胎，這一研究結(jié)果表明，某個(gè)物種的未受精卵可以同取自多種動(dòng)物的成熟細(xì)胞核相結(jié)合。雖然這些胚胎都流產(chǎn)了，但它對(duì)異種克隆的可能性作了有益的嘗試。1999年，美國(guó)科學(xué)家用牛卵子克隆出**動(dòng)物盤(pán)羊的胚胎；我國(guó)科學(xué)家也用兔卵子克隆了大熊貓的早期胚胎，這些成果說(shuō)明克隆技術(shù)有可能成為保護(hù)和拯救瀕危動(dòng)物的一條新途徑。

四、克隆技術(shù)的應(yīng)用前景
克隆技術(shù)已展示出廣闊的應(yīng)用前景，概括起來(lái)大致有以下四個(gè)方面：（1）培育畜種和生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；（2）生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；（3）生產(chǎn)人胚胎干細(xì)胞用于細(xì)胞和組織替代療法；（4）復(fù)制瀕危的動(dòng)物物種，保存和傳播動(dòng)物物種資源。以下就生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和胚胎干細(xì)胞作簡(jiǎn)要說(shuō)明。
轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究是動(dòng)物生物工程領(lǐng)域中誘人和有發(fā)展前景的課題之一，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可作為醫(yī)用器官移植的供體、作為生物反應(yīng)器，以及用于家畜遺傳改良、創(chuàng)建**實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷?。但目前轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的實(shí)際應(yīng)用并不多，除單一基因修飾的轉(zhuǎn)基因小鼠醫(yī)學(xué)模型較早得到應(yīng)用外，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)**蛋白的研究時(shí)間較長(zhǎng)，已進(jìn)行了10多年，但目前在全世界范圍內(nèi)僅有2例藥品進(jìn)入3期臨床試驗(yàn)，5～6個(gè)藥品進(jìn)入2期臨床試驗(yàn)；而其農(nóng)藝性狀發(fā)生改良、可資畜牧生產(chǎn)應(yīng)用的轉(zhuǎn)基因家畜品系至今沒(méi)有誕生。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制作效率低、定點(diǎn)整合困難所導(dǎo)致的成本過(guò)高和調(diào)控失靈，以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物有性繁殖后代遺傳性狀出現(xiàn)分離、難以保持始祖的勝狀，是制約當(dāng)今轉(zhuǎn)基因動(dòng)物實(shí)用化進(jìn)程的主要原因。
體細(xì)胞克隆的成功為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)掀起一場(chǎng)新的**，動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)為迅速放大轉(zhuǎn)基因動(dòng)物所產(chǎn)生的種質(zhì)**效果了技術(shù)可能。采用簡(jiǎn)便的體細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)實(shí)施目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)移，可以避免家畜生殖細(xì)胞來(lái)源困難和低效率。同時(shí)，采用轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞系，可以在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)基因整合預(yù)檢和性別預(yù)選。在核移植前，先把目的外源基因和標(biāo)記基因（如LagZ基因和新霉素抗生基因）的融合基因?qū)肱囵B(yǎng)的體細(xì)胞中，再通過(guò)標(biāo)記基因的表現(xiàn)來(lái)篩選轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性細(xì)胞及其克隆，然后把此陽(yáng)性細(xì)胞的核移植到去核卵母細(xì)胞中，后生產(chǎn)出的動(dòng)物在理論上應(yīng)是的陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。采用此法，Schnieke等（BioReport，1997）已成功獲得6只轉(zhuǎn)基因綿羊，其中3只帶有人凝血因子IX基因和標(biāo)記基因（新霉素抗性基因），3只帶有標(biāo)記基因，目的外源基因整合率高達(dá)50％。Cibelli（Science，1997）同樣利用核移植法獲得3頭轉(zhuǎn)基因牛，證實(shí)了該法的有效性。由此可以看出，當(dāng)今動(dòng)物克隆技術(shù)重要的應(yīng)用方向之一，就是高附加值轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物的研究開(kāi)發(fā)。
胚胎干細(xì)胞（ES）是具有形成所有成年細(xì)胞類(lèi)型潛力的全能干細(xì)胞。科學(xué)家們一直試圖誘導(dǎo)各種干細(xì)胞定向分化為特定的組織類(lèi)型，來(lái)替代那些受損的體內(nèi)組織，比如把產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞植入糖尿病患者體內(nèi)?？茖W(xué)家們已經(jīng)能夠使豬ES細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樘鴦?dòng)的心肌細(xì)胞，使人ES細(xì)胞生成神經(jīng)細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞和使小鼠ES細(xì)胞分化為內(nèi)胚層細(xì)胞。這些結(jié)果為細(xì)胞和組織替代療法開(kāi)辟了道路。目前，科學(xué)家已成功分離到人ES細(xì)胞（Thomson等1998，Science），而體細(xì)胞克隆技術(shù)為生產(chǎn)患者自身的ES細(xì)胞了可能。把患者體細(xì)胞移植到去核卵母細(xì)胞中形成重組胚，把重組胚體外培養(yǎng)到囊胚，然后從囊胚內(nèi)分離出ES細(xì)胞，獲得的ES細(xì)胞使之定向分化為所需的特定細(xì)胞類(lèi)型(如神經(jīng)細(xì)胞，肌肉細(xì)胞和血細(xì)胞），用于替代療法。這種核移植法的終目的是用于干細(xì)胞**，而非得到克隆個(gè)體，科學(xué)家們稱(chēng)之為“**克隆”。
克隆技術(shù)在基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用也是很有意義的，它為研究配子和胚胎發(fā)生，細(xì)胞和組織分化，基因表達(dá)調(diào)控，核質(zhì)互作等機(jī)理了工具。

五、克隆技術(shù)存在的問(wèn)題
盡管克隆技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用前景，但離產(chǎn)業(yè)化尚有很大距離。因?yàn)樽鳛橐粋€(gè)新興的研究領(lǐng)域，克隆技術(shù)在理論和技術(shù)上都還很不成熟，在理論上，分化的體細(xì)胞克隆對(duì)遺傳物質(zhì)重編（細(xì)胞核內(nèi)所有或大部分基因關(guān)閉，細(xì)胞重新恢復(fù)全能性的過(guò)程）的機(jī)理還不清楚；克隆動(dòng)物是否會(huì)記住供體細(xì)胞的年齡，克隆動(dòng)物的連續(xù)后代是否會(huì)累積突變基因，以及在克隆過(guò)程中胞質(zhì)線(xiàn)粒體所起的遺傳作用等問(wèn)題還沒(méi)有解決。
在實(shí)踐中，克隆動(dòng)物的成功率還很低，維爾穆特研究組在培育“多莉“的實(shí)驗(yàn)中，融合了277枚移植核的卵細(xì)胞，僅獲得了“多莉”這一只成活羔羊，成功率只有0.36％，同時(shí)進(jìn)行的胎兒成纖維細(xì)胞和胚胎細(xì)胞的克隆實(shí)驗(yàn)的成功率也分別只有1.7％和1.1％，即使是使用“檀香山”技術(shù)，以分化程度較低的卵丘細(xì)胞為核供體，其成功率也只有百分之幾。
此外，生出的部分個(gè)體表現(xiàn)出生理或**缺限。以克隆牛為例，日本、法國(guó)等國(guó)培育的許多克隆牛在降生后兩個(gè)月內(nèi)死去；到2000年2月，日本已共有121頭體細(xì)胞克隆牛誕生，但存活的只有64頭。觀(guān)察結(jié)果表明，部分犢牛胎盤(pán)功能不完善，其血液中含氧量及生長(zhǎng)因子的濃度都低于正常水平；有些牛犢的胸腺、脾和**腺未得到正常發(fā)育；克隆動(dòng)物胎兒普遍存在比一般動(dòng)物發(fā)育快的傾向，這些都可能是死亡的原因。
即使是正常發(fā)育的“多莉”，也被發(fā)現(xiàn)有早衰跡象。染色體的未端被稱(chēng)為端粒，它決定著細(xì)胞能夠分裂的次數(shù)：每一次分裂端粒都會(huì)縮短，而當(dāng)端粒耗盡后細(xì)胞就失去了分裂能力。1998年，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)“多莉”的細(xì)胞端粒比正常的要短，即其細(xì)胞處于更衰老的狀態(tài)。當(dāng)時(shí)認(rèn)為，這可能是用成年綿羊的細(xì)胞克隆“多莉”造成的，使其細(xì)胞具有成年細(xì)胞的印記，但這一解釋目前受到了挑戰(zhàn)，美國(guó)馬薩諸塞州的醫(yī)生羅伯特·蘭扎等用培養(yǎng)的衰老細(xì)胞克隆牛，得到6頭小牛，出生5～10個(gè)月后發(fā)現(xiàn)這些克隆牛的端粒比普通同齡小牛要長(zhǎng)，有的甚至比普通新生小牛的端粒還長(zhǎng)?，F(xiàn)在還不清楚這一現(xiàn)象的原因，也不清楚為何與“多莉“的情況有巨大差別。但這一實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，在一些情況下克隆過(guò)程能改變成熟細(xì)胞的分子鐘，使其“恢復(fù)青春”，關(guān)于這種變化對(duì)克隆動(dòng)物壽命的影響，還有待于進(jìn)一步觀(guān)察。
除了以上的理論和技術(shù)障礙外，克隆技術(shù)（尤其是在人胚胎方面的應(yīng)用）對(duì)倫理道德的沖擊和公眾對(duì)此的強(qiáng)烈反應(yīng)也限制了克隆技術(shù)的應(yīng)用。但幾年來(lái)克隆技術(shù)的發(fā)展表明，世界各科技大國(guó)都不甘落后，誰(shuí)也沒(méi)有放棄克隆技術(shù)研究。這一點(diǎn)上英國(guó)政府的態(tài)度非常具有代表性，在1997年2月底宣布中止對(duì)“多莉”研究小組投資后不到1個(gè)月，英國(guó)科技委員會(huì)就對(duì)克隆技術(shù)發(fā)表專(zhuān)題報(bào)告，表明英國(guó)政府將重新考慮這一決定，認(rèn)為盲目禁止這方面的研究并不是明智之舉，關(guān)鍵在于建立一定的規(guī)范利用它為人類(lèi)造福。
摘自《世界農(nóng)業(yè)》